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细胞学堂 | RAW 264.7诱导极化及鉴定大全

更新时间：2023-02-03  |  点击率：4642

RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）是破骨细胞、炎症研究最-常用的体外模型之一，被广泛用于研究风湿性关节炎、骨质疏松症、骨质溶解、牙周炎等骨骼疾病。


极化方式


巨噬细胞是具有异质性的一类免疫细胞，在体内外不同环境影响下可极化为不同表型参与机体生理、病理反应。从激活方式上分为经典激活的巨噬细胞M1和选择性激活的巨噬细胞M2。


1

M1型分化

细菌和脂多糖（LPS）可以诱导巨噬细胞向M1型分化，产生促炎细胞因子，抵抗病原入侵，但也会造成机体损伤，在实验中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小时诱导其极化；


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图1. a.RAW 264.7 未分化形态图 b.RAW 264.7 M1型分化形态图




2

M2型分化

白细胞介素（IL-4）可以诱导巨噬细胞向M2型分化，分泌抗炎细胞因子，并在组织修复与重建和肿瘤的形成过程中发挥作用，在实验中可采用10ng/mL IL-4作用12小时诱导其极化。


图2. RAW 264.7 不同分型形态图



鉴定方法


M1、M2具有各自特征性标志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常见的M1型巨噬细胞的标志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常见的M2型巨噬细胞标志分子。一般在实验研究中：

1

WB可以分析RAW264.7细胞iNOS、YM-1和Arg-1的表达水平（如图3）；


图3. WB分析照射对IL-4诱导的RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的表达影响

2

流式细胞术（FCM）可以分析RAW264.7细胞表面CD86和CD206的表达（如图4）；


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图4. 流式细胞术分析照射对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞CD206和CD209的表达

3

实时定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等细胞因子的表达及分泌(如图5）；


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图5. 用于实时荧光定量PCR的引物序列

4

Griess reagent 可以分析细胞培养上清 NO 生成（如图6）。


图6. 不同样品对RAW 264.7中NO产生的影响


参考文献


[1] 罗进芳, 朱瑞丽, 易浪,等. 青藤碱对LPS、IL-4诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2015, 31(1):5.

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